Terapia a laser de baixa potência no manejo da cicatrização de feridas cutâneas / Low-level laser therapy in the management of skin wound healing

Introdução: O reparo tecidual e a cicatrização de feridas cutâneas são processos complexos que envolvem uma série de eventos dinâmicos, incluindo coagulação, inflamação, formação de tecido de granulação, contração da ferida e remodelação tecidual. A necessidade de cuidar de pacientes com dificuldades na cicatrização de feridas é um desafio crescente e requer estratégias inovadoras. Uma abordagem que se destaca no tratamento dessas lesões é a laserterapia de baixa potência. Este estudo tem como objetivo demonstrar a aplicabilidade e os resultados de um protocolo de laserterapia de baixa potência no manejo da cicatrização de feridas cutâneas. Métodos: Trata-se de estudo retrospectivo de revisão de casos relatando o uso de laser no tratamento de feridas cutâneas em um centro único. Resultados: Avaliamos os resultados do uso de laserterapia de baixa potência e relatamos cinco casos de pacientes com feridas cutânea que não apresentaram melhora com o tratamento convencional. As lesões eram localizadas em sítios diversos, com lesão no tronco, membro superior e membro inferior. Os cinco casos apresentaram uma boa resposta com a terapia a laser, evoluindo com a cicatrização das feridas em um curto período de tempo, com período médio de cicatrização de 48 dias. Conclusão: Conclui-se que a laserterapia de baixa potência quando aplicada sobre feridas cutâneas sugere uma ação benéfica, promissora e tem um potencial para aumentar as opções terapêuticas disponíveis para o cirurgião, porém, como relatamos um número de cinco casos, há necessidade de mais estudos para verificar a eficiência do laser em feridas.

Introduction: Tissue repair and skin wound healing are complex processes that involve a series of dynamic events, including coagulation, inflammation, granulation tissue formation, wound contraction and tissue remodeling. The need to care for patients with difficulties in wound healing is a growing challenge and requires innovative strategies. One approach that stands out in the treatment of these injuries is low-power laser therapy. This study aims to demonstrate the applicability and results of a low-power laser therapy protocol in the management of skin wound healing. Methods: This is a retrospective case review study reporting the use of laser in the treatment of skin wounds in a single center. Results: We evaluated the results of the implementation of this low-power laser therapy protocol and reported five cases of patients with skin wounds that did not improve with conventional treatment. The lesions were located in different places, with lesions on the trunk, upper limb and lower limb. The five cases showed a good response to laser therapy, evolving with wound healing in a short period of time, with an average healing time of 48 days. Conclusion: It is concluded that low power laser therapy when applied to skin wounds suggests a beneficial, promising action and has the potential to increase the therapeutic options available to the surgeon, however as we report a number of five cases, further studies are needed for check laser efficiency on wounds.

Tratamento de feridas: Efeitos in vitro de aplicações farmacoterapêuticas do óleo de girassol (Helianthus annuus) / Wound healing: In vitro effects of the pharmacotherapeutic use of sunflower oil (Helianthus annuus) / Tratamiento de heridas: Efectos in vitro de las aplicaciones farmacoterapéuticas del aceite de girasol (Helianthus annuus)

Resumo Enquadramento: Óleos vegetais apresentam ação antimicrobiana e promovem a proliferação celular. O óleo de girassol é usado como alternativa para o tratamento de feridas cutâneas, especialmente nos países subdesenvolvidos ou em desenvolvimento. Objetivo: Caracterizar o óleo de girassol e avaliar os efeitos in vitro na proliferação celular e na atividade antimicrobiana. Metodologia: Análises por cromatografia a gás acoplada à espectrometria de massas, testes de proliferação celular e atividade antimicrobiana. Resultados: Na análise cromatográfica do óleo de girassol identificaram-se os compostos maioritários - ácidos gordos insaturados (82,2%) tendo como principais lípidos os ácidos linoleico (47,8%), oleico (28,7%) e linolênico (3,9%), seguidos pelos ácidos saturados (12,70%), palmítico (8,8%) e esteárico (3,6%). Houve diferença (p < 0,001) entre os tratamentos com óleo de girassol (100 e 10 µg/ml) e controlos negativos na proliferação celular. Ineficácia na atividade antimicrobiana frente às bactérias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae. Conclusão: A composição do óleo de girassol mostrou elevada concentração de ácidos gordos essenciais, promoveu proliferação celular, mas não inibiu atividade bacteriana.

Abstract Background: Vegetable oils have antimicrobial activity and promote cell proliferation. Sunflower oil is used as an alternative for treating skin wounds, particularly in underdeveloped or developing countries. Objective: To characterize sunflower oil and evaluate the in vitro effects on cell proliferation and antimicrobial activity. Methodology: The study was carried out using gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) analysis and cell proliferation and antimicrobial activity tests. Results: The chromatographic analysis identified the main components of sunflower oil, namely: unsaturated fatty acids (82.2%) with linoleic (47.8%), oleic (28.7%), and linolenic (3.9%) acids as the main lipids, followed by saturated (12.70%), palmitic (8.8%) and stearic (3.6%) acids. A difference (p < 0.001) in cell proliferation was found between treatments with sunflower oil (100 and 10 µg/ml) and the negative controls. It failed in antimicrobial activity against Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis, and Klebsiella pneumoniae. Conclusion: Sunflower oil contains a high concentration of essential fatty acids and promotes cell proliferation but fails to inhibit bacterial activity.

Resumen Marco contextual: Los aceites vegetales tienen acción antimicrobiana y promueven la proliferación celular. El aceite de girasol se utiliza como alternativa para tratar las heridas cutáneas, especialmente en los países subdesarrollados o en vías de desarrollo. Objetivo: Caracterizar el aceite de girasol y evaluar los efectos in vitro sobre la proliferación celular y la actividad antimicrobiana. Metodología: Análisis por cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masas, pruebas de proliferación celular y actividad antimicrobiana. Resultados: En el análisis cromatográfico del aceite de girasol, se identificaron los compuestos mayoritarios - ácidos grasos insaturados (82,2%), los principales lípidos son el ácido linoleico (47,8%), oleico (28,7%) y linolénico (3,9%), seguidos del ácido saturado (12,70%), palmítico (8,8%) y esteárico (3,6%). Hubo una diferencia (p < 0,001) entre los tratamientos con aceite de girasol (100 y 10 µg/ml) y los controles negativos en la proliferación celular. Actividad antimicrobiana ineficaz contra las bacterias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae. Conclusión: La composición del aceite de girasol mostró una alta concentración de ácidos grasos esenciales, promovió la proliferación celular, pero no inhibió la actividad bacteriana.

Valproic acid and bladder healing: an experimental study in rats / Ácido valpróico e cicatrização em bexiga: estudo experimental em ratos

ABSTRACT Purpose: to recognize the effects of valproic acid (VPA), an epigenetic drug, on the bladder healing process, in rats. Method: twenty male Wistar rats were divided in two groups: experimental (A), treated with VPA (150mg/Kg/day), and control (B) with 0.9% sodium chloridrate. Healing was analyzed on the third and seventh days, evaluating the inflammatory reaction, collagen synthesis and angiogenesis. Results: inflammatory reaction on the third day was minimal and acute in both groups. On the seventh day, it was subacute in both groups, moderate intensity in group A and minimal in group B (p=0.0476). Collagen III intensity, marked by immunohistochemistry, was similar in both groups. Collagen I intensity on the third day was similar in both groups, but on the seventh day it was higher in experimental than control (p=0.0476). Collagen evaluation by picrosiriusred allowed to verify that the presence of collagen III was similar in both groups (p=0.3312) on the third day, and it was higher in control on the seventh day (p=0.0015). Collagen I showed similarity on the third day (p=0.3100), and it was higher in control on the seventh day (p=0.0015). Vessel marked with anti-SMA counting showed fewer vessels on the third (p=0.0034) and seventh day (p=0.0087) in experimental group. The lower intensity of angiogenesis was confirmed with anti-CD34, on the third day (p=0,0006) and on the seventh day (p=0,0072). Conclusion: VPA determined alterations in the bladder healing process, in rats, with lower collagen density and less angiogenic activity, but without compromising the integrity of the organ.

RESUMO Objetivo: reconhecer os efeitos do ácido valpróico (VPA), uma droga epigenética, no processo de cicatrização da bexiga, em ratos. Método: vinte ratos Wistar machos foram divididos em dois grupos: experimental (A), utilizando VPA (150mg/Kg/dia), e controle (B), tratados com cloreto de sódio 0,9% por gavagem. A cicatrização da bexiga foi analisada no terceiro e sétimo dia, estudando-se a reação inflamatória, síntese de colágeno, reepitelização e angiogênese. Resultados: a reação inflamatória no terceiro dia foi mínima e aguda em ambos os grupos. No sétimo dia, foi subaguda em ambos os grupos com intensidade moderada no grupo A e mínima no grupo B (p=0,0476). A intensidade do colágeno III, marcada pela imuno-histoquímica, foi semelhante nos dois grupos, nos dois tempos estudados. A intensidade de colágeno I no terceiro dia foi semelhante nos dois grupos, e maior no sétimo dia no grupo experimental (p=0,0476). A avaliação do colágeno pelo picrosiriusred mostrou que a presença de colágeno III foi semelhante em ambos os grupos (p=0,3312) no terceiro dia, e maior no controle no sétimo dia (p=0,0015). O colágeno I foi semelhante no terceiro dia (p=0,3100), e maior no controle no sétimo dia (p=0,0015). A contagem de vasos marcados pelo anti-SMA mostrou menos vasos no terceiro (p=0,0034) e sétimo dia (p=0,0087) no grupo experimental, confirmado pelo anti-CD34, no terceiro (p=00006) e no sétimo dia (p=0,0072). Conclusão: o VPA determinou alterações no processo de cicatrização da bexiga, em ratos, com menor densidade de colágeno e menor atividade angiogênica, mas sem comprometer a integridade do órgão.

A Adiponectina Previne a Reestenose pela Inibição da Proliferação Celular em um Modelo de Enxerto Venoso em Ratos / Adiponectin Prevents Restenosis Through Inhibiting Cell Proliferation in a Rat Vein Graft Model

Resumo Fundamento: O enxerto de bypass na artéria coronária (CABG) continua a ser eficiente como tratamento para pacientes portadores de doença arterial coronariana; entretanto, o enxerto venoso tende a apresentar reestenose ou oclusão. A adiponectina (ADP) é uma proteína hormonal plasmática com a função de regular a proliferação celular. Objetivo: Foram utilizadas duas doses diferentes da proteína ADP em um modelo de enxerto venoso em ratos para estimular a alteração do enxerto venoso. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da ADP sobre a reestenose em enxerto venoso. Métodos: Veias jugulares autólogas foram implantadas como enxertos interposicionais de carótida pela técnica de anastomose de manga em ratos Sprague Dawley. A adiponectina (2,5 μg e 7,5 μg) foi entregue ao enxerto venoso por bypass de forma perivascular, suspensa em gel Pluronic-F127 a 30%. O grupo tratado apenas com bypass e o grupo tratado com gel veículo carregado apenas com Pluronic funcionaram como controle. Foram feitas comparações com análise de via única de variância e teste post-hoc, com p <0,05 sendo considerado significativo. Resultados: A proliferação celular (índice de PCNA) foi significativamente baixa no grupo tratado com adiponectina em comparação com o grupo de controle e o grupo tratado com o gel veículo na íntima e na adventícia dos enxertos a partir do dia 3 (p <0,01). VCAM-1 e ICAM-1 avaliados por imuno-histoquímica diminuíram significativamente em enxertos venosos tratados com adiponectina na quarta semana (p <0,01). O tratamento de enxertos venosos com gel carregado com adiponectina reduziu a espessura da íntima, da média e da adventícia, em comparação com os enxertos de controle e tratados com gel veículo no dia 28 (p <0,01). Conclusões: Este estudo oferece evidências adicionais do possível papel terapêutico da adiponectina na modulação de lesão vascular e seu reparo.

Abstract Background: Coronary artery bypass grafting (CABG) continues to be an effective therapy for coronary artery disease patients, but the vein graft is prone to restenosis or occlude. Adiponectin (ADP) is a plasma hormone protein with the function of regulating cell proliferation. Objective: This study used two different doses of ADP protein in a rat vein graft model to stimulate vein graft change. The aim of our study was to investigate the effect of ADP on vein graft restenosis. Methods: Autologous jugular veins were implanted as carotid interposition grafts through the anastomotic cuff technique in Sprague Dawley rats. Adiponectin (2.5 μg and 7.5 μg) was delivered to the vein bypass grafts in a perivascular fashion, suspended in a 30% Pluronic-F127 gel. No treatment (bypass only) and vehicle loaded Pluronic gel served as controls. Comparisons were made with one-way analysis of variance and a post-hoc test, with p < 0.05 considered significant. Results: Cell proliferation (PCNA index) was significantly low in adiponectin-treated versus control and vehicle-gel-treated grafts, both in intima and adventitia, as of day 3 (p < 0.01). VCAM-1 and ICAM-1 evaluated by immunohistochemistry significantly down-regulated in the adiponectin-treated vein grafts in the fourth week (p <0.01). Treatment of vein grafts with adiponectin-loaded gels reduced intimal, media, and adventitia thickness when compared with the control and vehicle-gel-treated vein grafts at day 28 (p < 0.01). Conclusions: Our studies provide further support for the potential therapeutic role of adiponectin in modulating vascular injury and repair.

The role of diffusion-weighted mri of patients with spine metastases / O papel da rm ponderada por difusão de pacientes com metástases da coluna vertebral / El papel de la rm ponderada por difusión de pacientes con metástasis de la columna vertebral

ABSTRACT Objective: The role of diffusion-weighted MRI in differential diagnostics and predicting the survival of patients with spine metastases was studied. Methods: The study included data from MRI and morphological studies of 23 patients with spine metastases. Results: The values obtained for the apparent diffusion coefficient (ADC) of tumors were compared with their histological type, cell density and Ki-67 proliferation index. The effect of ADC values on overall patient survival was also assessed. A reliable inverse correlation was established between ADC values and Ki-67 proliferation index for various types of spine metastases (r=-0.753, p=0.017). The dependence of ADC values and overall survival of patients with metastases in the spine is shown. Conclusion: The technique of diffusion-weighted MRI can be used as part of a comprehensive assessment in the preoperative planning of surgical treatment, and as a prognostic factor of overall survival for this group of patients. Level of Evidence II. Prognostic retrospective study,

RESUMO Objetivos: O papel da RM ponderada por difusão nos diagnósticos diferenciais e na previsão da sobrevida dos pacientes com metástases da coluna vertebral foram analisados. Métodos: O estudo incluiu dados da RM e estudos morfológicos de 23 pacientes com metástases da coluna vertebral. Resultados: Os valores obtidos para o coeficiente de difusão aparente (ADC) dos tumores foram comparados com seu tipo histológico, densidade celular e índice de proliferação Ki-67. Além disso, avaliou-se o efeito dos valores de ADC na sobrevida global dos pacientes. Foi estabelecida uma correlação inversa confiável entre os valores de ADC e o índice de proliferação Ki-67 para diversos tipos de metástases da coluna vertebral (r =-0,753, p=0,017). A dependência dos valores de ADC e a sobrevida global dos pacientes com metástases na coluna vertebral é demostrada. Conclusão: A técnica da RM ponderada por difusão pode ser utilizada como parte de uma avaliação abrangente do planejamento pré-operatório do tratamento cirúrgico e como fator prognóstico da sobrevida global para esse grupo de pacientes. Nível de Evidência II. Estudo retrospectivo prognóstico.

RESUMEN Objetivos: Fueron analizados el papel de la RM ponderada por difusión en los diagnósticos diferenciales y en la previsión de la sobrevida de los pacientes con metástasis de la columna vertebral. Métodos: El estudio incluyó datos de RM y estudios morfológicos de 23 pacientes con metástasis de la columna vertebral. Resultados: Los valores obtenidos para el coeficiente de difusión aparente (ADC) de los tumores se compararon con su tipo histológico, densidad celular e índice de proliferación Ki-67. Además, se evaluó el efecto de los valores de ADC en la sobrevida global de los pacientes. Se estableció una correlación inversa confiable entre los valores de ADC y el índice de proliferación Ki-67 para diversos tipos de metástasis de la columna vertebral (r =-0,753, p=0,017). Es demostrada la dependencia de los valores de ADC y la sobrevida global de los pacientes con metástasis en la columna vertebral. Conclusión: La técnica de RM ponderada por difusión puede utilizarse como parte de una evaluación integral de la planificación preoperatoria del tratamiento quirúrgico y como un factor pronóstico de la sobrevida global para este grupo de pacientes. Nivel de Evidencia II. Estudio retrospectivo pronóstico.

Avaliação da modulação por 7,12-Dimetilbenzantraceno (DMBA) da capacidade proliferativa de células T em camundongos airmax e airmin com gamaglobulina humana (HGG)

Polycyclic aromatic hydrocarbons (HPAs) are a class of substances widely distributed in the environment, many of which have toxic and carcinogenic potential for different species, including humans. 7,12-Dimethylbenzanthracene (DMBA) is a synthetic prototype of HPA. Among the various effects, these xenobiotics cause cytotoxicity, genotoxicity and, consequently, carcinogenesis and immunosuppression, according to results obtained experimentally in murine models. Mice treated with DMBA show marked decrease in T cell-mediated cytotoxicity, proliferative response to T-dependent mitogen and induction of cytokine production. The toxicity of DMBA is associated with the binding of this compound to the Aryl Hydrocarbon receptor (Ahr) whose binding triggers a series of intracellular events. The effects of activation of these receptors vary due to polymorphisms found in the Ahr gene. In murine model, these variations are closely associated with high Ahr alleles (Ahrb1) or low (Ahrd) affinity for HPAs. In two lines of mice phenotypically selected for maximal (AIRmax) or minimal (AIRmin) acute inflammatory response to the non-immunogenic substance, segregation of the Ahrd and Ahrb1 alleles was observed in AIRmax and AIRmin mice, respectively. With respect to the toxic effects of DMBA on the bone marrow, AIRmin animals develop blockage in the cell cycle, deficiency in myeloid differentiation and myelodysplasia, effects associated with Ahr gene polymorphism. Therefore, the objective of the work is to investigate the quantitative antibody production and proliferative capacity of T cells from animals immunized with HGG. We observed a modulation of the production of anti-HGG antibodies in the secondary response at doses of 12,5 and 25mg/kg body weight. Concerning the inhibition of proliferation, no significant effect was observed either on the specific proliferation with HGG or ConA. These results have shown, to date, that the modulation of the cellular response has not been affected by the depletion by the DMBA treatment, however DMBA may interfere with the antibody production function by B cells.

Os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) são uma classe de substâncias amplamente distribuídas no ambiente, muitas das quais com o potencial tóxico e carcinogênico para diferentes espécies, incluindo o ser humano. O 7,12- dimetilbenzantraceno (DMBA) é um protótipo sintético de HPA. Dentre os vários efeitos, estes xenobióticos causam citotoxicidade, genotoxicidade e, consequentemente, carcinogênese e imunossupressão, conforme resultados obtidos experimentalmente em modelos murinos. Camundongos tratados com DMBA apresentam diminuição acentuada na citotoxicidade mediada por célula T, na resposta proliferativa ao mitógeno T dependente e na indução da produção de citocinas. A toxicidade do DMBA está associada à ligação desse composto ao receptor Aril Hidrocarboneto (Ahr) cuja ligação desencadeia uma série de eventos intracelulares. Os efeitos da ativação desses receptores variam devido a polimorfismos encontrados no gene Ahr. Em modelo murino, essas variações estão intimamente associadas com alelos Ahr de alta (Ahrb1) ou baixa (Ahrd) afinidade para os HPAs. Em duas linhagens de camundongos fenotipicamente selecionados para máxima (AIRmax) ou mínima (AIRmin) resposta inflamatória aguda à substância não imunogênica, foi observado segregação dos alelos Ahrd e Ahrb1 nas linhagens AIRmax e AIRmin, respectivamente. Com relação aos efeitos tóxicos do DMBA na medula óssea, os animais AIRmin desenvolvem bloqueio no ciclo celular, deficiência na diferenciação mielóide e mielodisplasia, efeitos estes associados ao polimorfismo do gene Ahr. Portanto, o objetivo do trabalho foi o de investigar a capacidade proliferativa das células T oriundas de animais imunizados com HGG e submetidos ou não ao tratamento com DMBA, além da avaliação quantitativa da produção de anticorpos anti-HGG. Observamos uma modulação da produção de anticorpos anti-HGG na resposta secundária com as doses de 12,5 e 25mg/Kg de peso corpóreo. No que concerne à inibição da proliferação, nenhum efeito significativo foi observado tanto na proliferação específica com HGG como com ConA. Estes resultados demonstraram, até o momento, que a modulação da resposta celular não foi afetada pela depleção causada pelo DMBA, no entanto pode interferir com a função de produção de anticorpos pelas células B.

Hsp27 expression and ratio between cell proliferation rate and apoptosis in breast cancer with and without axillary metastases / Expressão de Hsp27 e razão entre os índices de proliferação celular e apoptose em carcinoma de mama com e sem metástases axilares

ABSTRACT Introduction: The involvement of the immune system in the process of neoplasms has been increasingly studied due to its potential in antitumor therapy. Objectives: To evaluate the expression of heat shock protein 27 (Hsp27) in tissue samples from invasive ductal carcinomas with and without the presence of axillary sentinel lymph node metastasis, as well as to study the relationship of cell proliferation rate (Ki-76) and apoptosis (caspase 3) compared with samples of fibrocystic change in breast tissue. Methods: Cross-sectional study with tissue samples collected at the Hospital São Lucas, between September 2001 and October 2009, divided into three groups: 1. fibrocystic breast change (control group); 2. invasive ductal carcinoma of the breast with presence of lymph node metastasis; and 3. absence of lymph node metastasis. Results: Increased Hsp27 expression was observed in the group of non-metastasis carcinomas when compared to the other groups. There was difference in Ki-67 protein expression and in the ratio between cell proliferation and apoptosis among the carcinoma groups compared to the control group. However, there was no significant difference between the carcinoma groups or between the expressions of caspase 3 in the three groups, when compared to each other. Conclusion: Quantitative analysis of Hsp27 demonstrated increased protein expression in primary neoplasm tissues and in lymph nodes in carcinomas without axillary sentinel lymph node metastasis. Although the methodology and the number of cases do not allow concluding that this behavior in metastatic disease is a constant finding, this justifies the need to evaluate this finding in future studies.

RESUMO Introdução: O envolvimento do sistema imunológico no processo de neoplasias vem sendo cada vez mais estudado devido ao seu potencial em terapia antitumorais. Objetivos: Avaliar a expressão de heat shock protein 27 (Hsp27) em amostras teciduais de carcinomas ductais invasores com e sem presença de metástase em linfonodo sentinela axilar, bem como estudar a relação da taxa de proliferação celular (Ki-76) e apoptose (caspase 3) em comparação com amostras de alteração fibrocística no tecido mamário. Métodos: Estudo transversal com amostras de tecidos coletados no Hospital São Lucas, entre setembro de 2001 e outubro de 2009, divididas em três grupos: 1. alteração fibrocística da mama (grupo-controle); 2. carcinoma ductal invasor de mama com presença de metástase linfonodal; e 3. sem presença de metástase linfonodal. Resultados: Observou-se expressão aumentada da Hsp27 no grupo de carcinomas sem metástase, quando comparado com os demais grupos. Houve diferença na expressão da proteína Ki-67 e na razão entre proliferação celular e apoptose entre os grupos com carcinoma quando comparados com o grupo-controle. Contudo, não houve diferença significativa entre os grupos com carcinoma ou entre a expressão de caspase 3 nos três grupos, quando comparados entre si. Conclusão: A análise quantitativa da Hsp27 demonstrou maior expressão da proteína nos tecidos da neoplasia primária e nos linfonodos em carcinomas sem metástase em linfonodo sentinela axilar. Embora a metodologia e o número de casos não permitam concluir que esse comportamento na doença metastática seja um achado constante, justifica-se a necessidade de avaliar esse achado em estudos futuros.

Tissue immunostaining of growth, pro- and anti-apoptotic biomarkers in myocardial samples from newborns with hypoxic injury / Imunoexpressão tecidual de biomarcadores de crescimento, pró e antiapoptóticos, em amostras de miocárdio de recém-nascidos com lesão hipóxica

ABSTRACT Introduction: Despite the importance of cardiovascular diseases to population health, there is limited knowledge about how neonatal hypoxia, related or not with prematurity, may cause cell injury to cardiomyocytes in the neonatal period and what the consequences to adult life are. Objective: To analyze the tissue immunostaining of biomarkers involved in the process of cell death and growth in the myocardium of hypoxic newborns. Method: Human myocardium samples (left ventricle) from necropsies of hypoxic newborns were organized in multi-sample blocks and submitted to immunohistochemical reactions by the immunoperoxidase technique. The primary antibodies used were anti-B-cell lymphoma 2 (Bcl2)-associated X protein (BAX), anti-mitofusin-2 (Mfn2), anti-tumor necrosis factor receptor-associated protein 1 (TRAP1), anti-Bcl2, anti-angiotensin II, anti-serine/threonine (Akt) 1, anti-Akt2 and anti-Akt3. Tissue immunostaining data were correlated with clinical data (gender, weight, gestational age, first-minute and fifth-minute Apgar score, arterial blood pH and survival time) and pathological data (death cause and primary disease). Results: The average tissue immunostaining of BAX was 25.61%; TRAP1 was 7.86%, angiotensin II was 1.24%, Akt2 was 16.35% and Akt3 was 20.61%. The biomarkers Akt1, Mfn2 and Bcl2 presented very low or absent tissue immunostaining in most cases of this study. There was no correlation between the average biomarker tissue immunostaining and the survival time or any other clinical or pathological factor studied. Conclusion: These data seem to strengthen the coordinated action of the pro-apoptotic, anti-apoptotic and cell growth biomarkers in the myocardium of hypoxic newborns in order to determine the degree of lesion or cell death and the tissue recovery capacity.

RESUMO Introdução: Apesar da importância de novas descobertas em patofisiologia das doenças cardiovasculares para a saúde da população, ainda existe pouco conhecimento sobre como a hipóxia neonatal, relacionada ou não com a prematuridade, pode causar lesão celular nos cardiomiócitos no período perinatal e quais são as consequências para a vida adulta. Objetivo: Analisar a imunoexpressão tecidual de biomarcadores envolvidos no processo de morte e crescimento celular em miocárdio de recém-nascidos hipoxemiados. Método: Amostras de miocárdio humano (ventrículo esquerdo), provenientes de necrópsias de neonatos hipoxemiados, foram organizadas em blocos multiamostrais e submetidas a reações imuno-histoquímicas pela técnica da imunoperoxidase. Os anticorpos primários utilizados foram antilinfoma de células B tipo 2 (Bcl2), antiproteína X associada ao Bcl2 (BAX), antimitofusina 2 (Mfn2), antiproteína 1 relacionada com o receptor ao fator de necrose tumoral (TRAP1), antiangiotensina II, antiproteína quinase 1 (Akt1), antiproteína quinase 2 (Akt2) e antiproteína quinase 3 (Akt3). Os dados de imunoexpressão tecidual foram correlacionados com os dados clínicos (gênero, peso, idade gestacional, índice de Apgar do primeiro e quinto minuto, pH do sangue arterial e sobrevida) e anatomopatológicos (causa da morte e doença de base). Resultados: A média de imunoexpressão tecidual do BAX foi 25,61%; do TRAP1, 7,86%; da angiotensina II, 1,24%; do Akt2, 16,35%; e do Akt3, 20,61%. Os biomarcadores Akt1, Mfn2 e Bcl2 apresentaram imunoexpressão tecidual muito baixa ou ausente na maioria dos casos deste estudo. Não houve correlação da média de imunoexpressão tecidual dos biomarcadores com o tempo de sobrevida ou outro fator clínico ou anatomopatológico estudado. Conclusão: Esses dados parecem fortalecer a ação coordenada de biomarcadores pró e antiapoptóticos e de crescimento celular em miocárdio de recém-nascidos hipoxemiados a fim de determinar o grau de lesão ou morte celular e a capacidade de recuperação tecidual.

Estudo in vitro do padrão de crescimento e proliferação celular de pré-osteoblastos humanos com bio-oss® e genox® / In vitro study of growth and proliferation of human pre-osteoblast on bio-oss® and genox®

Objetivo: O presente trabalho avaliou o padrão de crescimento, o índice de proliferação celular e morfologia de pré-osteoblastos humanos cultivados com Bio-Oss® e GenOx®. Material e Método: Pré-osteoblastos humanos MC3T3-E1 foram cultivados em contato com os biomateriais por 1, 24 e 72horas para avaliação da proliferação celular, medido com o teste colorimétrico MTS. Para a avaliação do padrão de crescimento e da morfologia celular, as células foram cultivadas por 24 e 72 horas, respectivamente e avaliadas sob microscopia de contraste de fase e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Para verificação de diferenças no crescimento celular entre os grupos foi utilizado o teste one-way de ANOVA, sendo considerados significantes valores de p<0,05. Resultados: A proliferação celular foi maior na primeira hora nas amostras em contato com os biomateriais em comparação ao grupo controle. Nos períodos de 24 e 72 horas de cultivo celular, a curva de crescimento não mostrou diferença estatisticamente significante entre os grupos (p>0.05). Na microscopia de contraste de fase observou-se que as células cresceram em proximidade aos biomateriais, iniciando a formação da monocamada de maneira semelhante. Quando analisadas no MEV, as células cultivadas sobre os biomateriais apresentaram-se com formato fusiforme e núcleo arredado. Conclusão: Com a comparação do comportamento biológico de Bio-Oss® e GenOx®, realizada in vitro neste estudo, pôde-se observar que apesar das diferenças físico-químicas, o padrão, índice de crescimento e morfologia celular de Bio-Oss® e GenOx® se mostraram semelhantes, e que ambos materiais são biocompatíveis e representam uma boa opção como substitutos ósseos.

Objective: The present study aimed to evaluate the growth pattern, cell proliferation index and morphology of human preosteoblasts cultured with Bio-Oss® and GenOx®. Material and Methods: MC3T3-E1 human pre-osteoblasts were cultured in contact with biomaterials for 1, 24 and 72 hours for the cell proliferation assay with the colorimetric test MTS. For the growth pattern and cell morphology analysis, the cells were cultured for 24 and 72 hours, respectively, and evaluated under phase contrast microscopy and scanning electron microscopy. To verify differences in cell growth among the groups, the one-way ANOVA test was used (p <0.05). Results: In the first hour of cell culture the cell proliferation was pronounced in samples in contact with the biomaterials. At 24 and 72 hours of cell culture, no significant differences between the groups was observed in respect of cell proliferation. In phase contrast microscopy it was noted that the cells grew in proximity to the biomaterials, initiating the formation of a monolayer. When analyzed in the scanning electron microscopy, the cells cultured on the biomaterials presented a fusiform morphology and a round nucleus. Conclusion: Despite the physico-chemical differences between Bio- Oss® and GenOx®, these two biomaterials presented a similar growth index and cell morphology analysis, showing that both biomaterials are biocompatible and represent a good choice as bone substitutes.

Efeito de campos magnéticos estáticos e compensados na proliferação celular in vitro / Proteomics of the effect of compensated and static magnetic fields on cell proliferation in vitro

Inserido no paradigma da transdisciplinaridade, o presente trabalho foi desenvolvido em etapas, com os seguintes objetivos: a) Construir um dispositivo com base de metal não magnético para ímãs permanentes, visando à geração de um Campo Magnético Estático (CME) ou de um Campo Magnético Compensado (CMC); b) Expor culturas de células mesenquimais a um CME e a um CMC, ou a nenhum campo (controle); c) Analisar a influência destes campos na viabilidade e proliferação celular e nos casos em que houve alteração em pelo menos um destes parâmetros, utilizar a análise proteômica como ferramenta para a compreensão dos mecanismos envolvidos. O dispositivo foi construído utilizando aço inoxidável, capaz de gerar dois tipos de Campos Magnéticos: Compensado (CMC) com intensidade de aproximadamente 0 mT e Estático (CME) com intensidade média de 165 mT. Estes campos foram aplicados a culturas de células mesenquimais de medula óssea de camundongos AJ (MSC/AJ), nos períodos de 0, 24, 48, 72 e 96 h (CMC) e 24 h (CME). Os efeitos sobre a proliferação e a viabilidade foram avaliados por método de contagem manual de células com marcação por azul de tripan. A análise proteômica foi realizada para os experimentos com CMC, com o objetivo de descrever as proteínas envolvidas nas alterações encontradas. A exposição ao CMC tendeu a reduzir a proliferação das células de medula óssea MSC/AJ em relação ao controle em 96 h, porém sem diferença significativa, o que poderia estar relacionado a proteínas que inibem a transcrição, como a Forkhead box protein P2 Foxp2. Este mesmo campo aumentou a viabilidade celular em relação ao baseline para todos os tempos experimentais, o que poderia estar relacionado a proteínas relacionadas à ligação ao Ca+2. Esses mecanismos, entretanto, precisam ser estudados mais profundamente para que possam ser comprovados ou não. Já a exposição ao CME levou a uma tendência à diminuição da proliferação e viabilidade celular em relação ao grupo controle, embora sem diferenças significativas, provavelmente por conta do tamanho amostral e tempo de avaliação (24 h).(AU)

Inserted in the transdisciplinarity paradigm, the present work was developed by steps with the following aims: a) To build a device of non-magnetic metal to hold permanent magnets for the generation of a Static Magnetic Field (SMF) or a Compensated Magnetic Field (CMF); b) To expose mesenchimal cells to the SMF and to CMF or to none of the fields (control); c) To analyze the influence of these fields on cell viability and cell proliferation and in the case where it occurred alteration in at least one of these parameters, to use proteomics as a tool for the comprehension of the involved mechanisms. The device was built in stainless steel, able to generate two kinds of Magnetic Fields: Compesated (CMF) with an intensity of nearly zero mT and Static (SMF) with a mean intensity of 165 mT. These fields were applied to bone marrow mesenchimal cell cultures from AJ mice (MSC/AJ), for 0, 24, 48, 72 and 96 h (CMF) and 24 h (SMF) periods. The effects on the proliferation and viability were assessed by tripan blue dying and manual counting of the cells. Proteomics was done for the experiments with CMF, aiming to describe the involved proteins on found alterations. The exposition to CMF tends to reduce the bone marrow cell proliferation of MSC/AJ in relation to control in 96 h, but with no significant difference, which may be related to proteins that inhibit the transcription, like Forkhead box protein P2 Foxp2. This very field raised the cell viability in relation to the baseline for all the experimental times that could be related to proteins connected to Ca2+ binding. However, these mechanisms need more experiments, so they can be confirmed or not. The exposition to the SMF tends to decrease both cell proliferation and viability in relation to the control group, although with no significant difference, probably because of the sample number and the exposition time (24h).(AU)

Immunohistochemical analysis of apoptosis and cell proliferation in lungs of premature infants with chronic lung disease (bronchopulmonary dysplasia) / Análise imuno-histoquímica da apoptose e proliferação celular em pulmões de prematuros com doença pulmonar crônica (displasia broncopulmonar)

ABSTRACT Introduction: The pathophisiology of chronic lung disease (CLD), clinically known as bronchopulmonary dysplasia is not clear. It is believed that protective mechanisms, such as the release of inflammatory mediators and the activation of apoptotic and/or proliferative processes are activated in the lung tissue of premature infants in an attempt to repair tissue injury caused by exposure to oxygen and mechanical ventilation. Objective: Assess the presence of apoptosis and cell proliferation in the lungs of premature infants with CLD, exposed to oxygen and/or mechanical ventilation, by analyzing the proteins expression: proliferating cell nuclear antigen (PCNA), phosphatase and tensin homolog (PTEN), B-cell lymphoma 2 (Bcl-2), tumor necrosis factor receptor family member (Fas), fas-associated protein with death domain (FADD), tumor necrosis factor receptor type 1-associated death domain protein (TRADD), Caspase 3 and Caspase 8. Material and methods: We analyzed 32 infants autopsies at gestational age of less than 34 weeks exposed to oxygen therapy. The study was divided into three groups: "classic" CLD, "new" CLD and "without" CLD. Immunohistochemical analysis was performed. Results and discussion: A higher proliferation rate was observed in infants with CLD suggesting that longer exposure to mechanical ventilation may stimulates cell proliferation. The PTEN and Caspase 8 expressions were higher in the "new" CLD group, compared to the "without" CLD group, indicating that the "new" CLD form is more susceptible to apoptosis. Conclusion: Apoptosis and cell proliferation are involved in the pathophisiology of CLD. The "new" CLD form is more susceptible to apoptosis, while cell proliferation is more evident in the groups with CLD.

RESUMO Introdução: A fisiopatologia da doença pulmonar crônica, clinicamente conhecida como displasia broncopulmonar (DBP), ainda é incerta. Acredita-se que mecanismos de proteção, como liberação de mediadores inflamatórios e ativação de processos apoptóticos e/ou proliferativos, são acionados no tecido pulmonar de prematuros na tentativa de reparar os danos teciduais causados pela exposição ao oxigênio e à ventilação mecânica. Objetivo: Avaliar a existência de apoptose e proliferação celular em pulmões de neonatos prematuros com DBP, expostos ao oxigênio e/ou à ventilação mecânica, por meio do estudo da expressão das proteínas: antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA), homólogo da fosfatase e tensina (PTEN), linfoma de células B 2 (Bcl-2), membro da família de receptor do fator de necrose tumoral (Fas), proteína de domínio de morte associada ao Fas (FADD), proteína do domínio de morte associada ao receptor do fator de necrose tumoral (TRADD), Caspase 3 e Caspase 8. Material e método: Foram analisadas 32 autópsias de recém-nascidos, com idade gestacional inferior a 34 semanas, expostos ao oxigênio. O estudo foi dividido em três grupos: DBP "clássica", DBP "nova" e "sem" DBP; realizou-se estudo imuno-histoquímico. Resultados e discussão: Um índice de proliferação mais elevado foi observado nos recém-nascidos com DBP, sugerindo que o maior tempo de exposição à ventilação mecânica pode estimular a proliferação celular. A expressão das proteínas PTEN e Caspase 8 foram maiores no grupo da DBP "nova" em relação ao grupo sem DBP, indicando que a DBP "nova" é mais suscetível à apoptose. Conclusão: A apoptose e a proliferação celular estão envolvidas na fisiopatologia da DBP, sendo a apoptose mais evidente no grupo com DBP "nova".

Etapas da progressão do carcinoma espinocelular cutâneo: estudo imuno-histoquímico das proteínas p53 e Ki-67 e de marcadores endoteliais / Steps of progression in cutaneous squamous cell carcinoma: an immunohistochemical study of p53 and Ki67 proteins and endothelial markers

As etapas cruciais da carcinogênese cutânea incluem disfunção da proteína supressora tumoral p53 e angiogênese. A contribuição de tais eventos, individual e sinergicamente, ainda não está bem estabelecida na cascata de fenômenos que resultam no carcinoma espinocelular cutâneo. Objetivou-se avaliar a expressão imuno-histoquímica da p53, o índice proliferativo e a angiogênese nos estádios evolutivos do carcinoma espinocelular cutâneo, e investigar a relação da expressão da p53 com as demais variáveis. Foram estimadas as porcentagens de células imunomarcadas para p53 e Ki-67 em três grupos de cânceres: 30 queratoses solares, 30 carcinomas espinocelulares superficialmente invasores e 30 carcinomas espinocelulares invasores. O método Chalkley foi utilizado para quantificar a área microvascular, empregando-se marcador de neoangiogênese (CD105) e pan-endotelial (CD34) em cada grupo. A área microvascular em amostras marcadas pelo CD105 aumentou, significantemente, com a progressão do carcinoma espinocelular cutâneo. O mesmo não ocorreu com o uso do CD34. Contudo, nos três grupos (queratose solar, carcinoma espinocelular superficialmente invasor e invasor) encontrou-se aumento significante da área microvascular, com ambos os marcadores (CD34 e CD105), em comparação à respectiva pele adjacente. Não houve diferença significante na taxa de células positivas para p53 e Ki-67 entre os grupos. Encontrou-se correlação positiva e significante entre a área microvascular marcada pelo CD105 e o índice de marcação para a p53 no carcinoma espinocelular superficialmente invasor, bem como entre o índice de marcação para p53 e para o Ki-67 no carcinoma espinocelular invasor. A conversão angiogênica é um evento precoce no carcinoma espinocelular cutâneo, e a neovascularização é paralela à progressão do tumor. O uso do CD105 permite avaliar a atividade angiogênica no tumores escamosos. A angiogênese no estádio inicial da invasão e a atividade proliferativa na fase francamente invasora estão associadas com a expressão imuno-histoquímica da proteína p53. A perda da função supressora tumoral da p53, em etapas progressivas, atua diretamente na carcinogênese cutânea. (AU)

Multistep skin carcinogenesis crucially involves loss of function of p53 tumor suppressor protein and angiogenesis. The contribution of such events, individually and synergically, is not well established in the cascade of phenomena that results in cutaneous squamous cell carcinoma. We aimed to evaluate the immunohistochemical expression of p53, the proliferative index and angiogenesis in spectral stages of cutaneous squamous cell carcinoma, and investigate the relationship between p53 expression with the other variables. We estimated the percentages of immunostained cells for p53 and Ki-67 (proliferation marker) in three groups of cancer: 30 solar keratoses, 30 superficially invasive squamous cell carcinomas and 30 invasive squamous cell carcinomas. The Chalkley method was used to quantify the microvascular area by neoangiogenesis (CD105) and panendothelial (CD34) immunomarker in each group. The microvascular area in CD105-stained specimens significantly increased with cutaneous squamous cell carcinoma progression. However, no differences between groups were found in CD34 sections. Solar keratosis, superficially invasive squamous cell carcinoma and invasive squamous cell carcinoma samples showed significant increases in microvascular area for both CD34- and CD105-stained specimens compared with the respective adjacent skin. There was no significant difference for the rate of p53- and Ki-67-positive cells between the groups. Significant positive correlation was found between the CD105 microvascular area and the rate of p53 positive cells in superficially invasive squamous cell carcinoma as well as between the rate of p53- and Ki-67-positive cells in invasive squamous cell carcinoma. The angiogenic switch is an early event in cutaneous squamous cell carcinoma, and the rate of neovascularization is parallel to tumor progression. In contrast to panendothelial markers, CD105 use allows evaluating angiogenic activity in squamous tumors. Neovascularization in the initial stage of invasion and proliferative activity in the frankly invasive stage were both associated with p53 immunoexpression. Loss of p53 tumor suppressor function through progressive steps is directly involved in skin carcinogenesis.(AU)

Gene expression profile of ABC transporters and cytotoxic effect of ibuprofen and acetaminophen in an epithelial ovarian cancer cell line in vitro / Perfil da expressão gênica dos transportadores ABC e efeito citotóxico do ibuprofeno e acetaminofen em uma linhagem celular de câncer epitelial de ovário in vitro

PURPOSES: To determine the basic expression of ABC transporters in an epithelial ovarian cancer cell line, and to investigate whether low concentrations of acetaminophen and ibuprofen inhibited the growth of this cell line in vitro. METHODS: TOV-21 G cells were exposed to different concentrations of acetaminophen (1.5 to 15 μg/mL) and ibuprofen (2.0 to 20 μg/mL) for 24 to 48 hours. The cellular growth was assessed using a cell viability assay. Cellular morphology was determined by fluorescence microscopy. The gene expression profile of ABC transporters was determined by assessing a panel including 42 genes of the ABC transporter superfamily. RESULTS: We observed a significant decrease in TOV-21 G cell growth after exposure to 15 μg/mL of acetaminophen for 24 (p=0.02) and 48 hours (p=0.01), or to 20 μg/mL of ibuprofen for 48 hours (p=0.04). Assessing the morphology of TOV-21 G cells did not reveal evidence of extensive apoptosis. TOV-21 G cells had a reduced expression of the genes ABCA1, ABCC3, ABCC4, ABCD3, ABCD4 and ABCE1 within the ABC transporter superfamily. CONCLUSIONS: This study provides in vitro evidence of inhibitory effects of growth in therapeutic concentrations of acetaminophen and ibuprofen on TOV-21 G cells. Additionally, TOV-21 G cells presented a reduced expression of the ABCA1, ABCC3, ABCC4, ABCD3, ABCD4 and ABCE1 transporters. .

OBJETIVOS: Determinar a expressão básica dos transportadores ABC em uma linhagem celular do câncer epitelial de ovário, e investigar se o acetaminofen e o ibuprofeno em baixas concentrações são capazes de inibir o crescimento desta linhagem celular in vitro. MÉTODOS: A linhagem celular TOV-21 G foi exposta a diferentes concentrações de acetaminofen (1,5 a 15 µg/mL) e ibuprofeno (2,0 a 20 µg/mL), de 24 a 48 horas. O crescimento celular foi avaliado utilizando-se um ensaio de viabilidade celular. A morfologia celular foi determinada por meio da microscopia de fluorescência. O perfil de expressão gênica foi estabelecido por um painel de 42 genes da superfamília de transportadores ABC. RESULTADOS: Observou-se um decréscimo significativo no crescimento das células TOV-21 G expostas a 15 µg/mL de acetaminofen durante 24 (p=0,02) e 48 horas (p=0,01), ou a 20 µg/mL de ibuprofeno por 48 horas (p=0,04). Ao avaliar a morfologia das células cultivadas, não foi observada evidência de apoptose extensiva. A linhagem de células estudada subexpressa os genes de ABCA1, ABCC3, ABCC4, ABCD3, ABCD4 e ABCE1 na superfamília de transportadores ABC. CONCLUSÕES: Este estudo fornece evidências in vitro referentes aos efeitos inibidores do crescimento de concentrações terapêuticas do acetaminofen e ibuprofeno na linhagem celular testada. Além disso, as células TOV-21 G apresentaram uma expressão reduzida de genes dos transportadores ABCA1, ABCC3, ABCC4, ABCD3, ABCD4 e ABCE1. .

Avaliação da produção de citocinas, expressão gênica e análise funcional de células SHED expostas ao LTA bacteriano / Evaluation of cytokines production, gene expression and functional analysis of SHED cells exposed to LTA

Células-tronco da polpa dentária humana são promissoras no tratamento endodôntico, porém antes de utilizá-las clinicamente, deve-se entender suas propriedades biológicas em resposta a estímulos, como o ácido lipoteicóico (LTA) bacteriano. O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento de células SHED (Stem cells from Human Exfoliated Deciduous teeth) após exposição ao LTA bacteriano, verificando os efeitos na proliferação e metabolismo celular, atividade da fosfatase alcalina, deposição de cálcio, expressão de genes associados à mineralização, e liberação de citocinas. Foram utilizadas células SHED tratadas com LTA em diferentes concentrações, sem e com indutores da mineralização (IM). O metabolismo e a proliferação celular foram avaliados pelos ensaios de XTT e SRB. As células foram submetidas a um ensaio enzimático da atividade de fosfatase alcalina, para observação da ativação de processos de mineralização. E foi analisada qualitativamente a presença de deposição de cálcio pelas células pelo ensaio de alizarin vermelho (ARS). A expressão dos genes DSPP (Dentin Sialophosphoprotein) e DMP-1 (Dentin Matrix Protein-1) foi avaliada pela técnica do PCR (Polymerase Chain Reaction). O teste ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) foi realizado para detectar e quantificar as citocinas IL-1ß (Interleucina-1ß), IL-6 (Interleucina-6), TNF-α (Fator de Necrose Tumoral-α). Os dados obtidos nos ensaios quantitativos foram analisados estatisticamente por ANOVA complementada pelo teste de Tukey (p<0,05). Foi observado um aumento no metabolismo e proliferação celular com o tempo, não havendo diferenças entre os grupos testados em cada período. Nos grupos sem IM, observou-se um aumento da atividade da fosfatase alcalina das células expostas ao LTA comparados ao controle. Os grupos com indutores de mineralização apresentaram maiores quantidades de calcificações, comparados aos grupos sem IM. Após 3 dias, as células tratadas com LTA bacteriano apresentaram mais zonas ...

Dental pulp stem cells are promising in endodontics, but before clinical treatment it should be studied to understand its biological properties in response to stimuli such as lipoteichoic acid (LTA). The aim of this study was to evaluate the behavior of Stem cells from Human Exfoliated Deciduous teeth (SHED) exposed to LTA, analyzing cell proliferation and metabolism, alkaline phosphatase activity, calcium deposition, gene expression, cytokines production. SHED cells were treated with LTA, in different concentrations, without and with mineralization induction (MI). Cell metabolism and proliferation were evaluated by XTT and SRB. Alkaline phosphatase activity was performed to indicate mineralization process. Also, calcium deposition was observed qualitatively by alizarin red. Gene expression of DSPP (Dentin Sialophosphoprotein) and DMP-1 (Dentin Matrix Protein-1) was evaluated by PCR (Polymerase Chain Reaction). Cytokines IL-1ß (Interleukin-1ß), IL-6 (Interleukin-6), TNF-α (Tumor Necrosis Factor-α) were detected and quantified by ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Statistical analysis of quantitative tests were performed by ANOVA and Tukey test (p<0,05). Metabolism and cell proliferation increased with time and no differences were observed between groups in each period. In groups without MI, there was an increase in alkaline phosphatase activity of cells exposed to LTA compared to control. Groups with mineralization induction showed more calcium deposition, compared to the groups without MI. After 3 days, cells treated with LTA showed more areas of calcification compared to control, and after periods of 7 and 14 days were similar. All groups tested expressed genes DSPP and DMP-1, being slightly higher in groups with MI. The expression of IL-1ß and TNF-α by cells of the tested groups were similar, and IL-6 concentration was expressive, with differences between groups and time periods. According to the methodology and analysis ...

Histologic correlation of expression of Ki-67 in squamous cell carcinoma of the glottis according to the degree of cell differentiation.

INTRODUCTION: Squamous cell carcinoma is the most common neoplasm of the larynx and glottis, and its prognosis depends on the size of the lesion, level of local invasion, cervical lymphatic spread, and presence of distant metastases. Ki-67 (MKI67) is a protein present in the core, whose function is related to cell proliferation. AIM: To evaluate the expression of marker Ki-67 in squamous cell carcinoma of the larynx and glottis and its correlation to pathological findings. METHODS: Experimental study with immunohistochemistry analysis of Ki-67, calculating the percentage of the cell proliferation index in glottic squamous cell carcinomas. RESULTS: Sixteen cases were analyzed, with six well-differentiated and 10 poorly/moderately differentiated tumors. There was a correlation between cell proliferation index and degree of cell differentiation, with higher proliferation in poorly/moderately differentiated tumors. CONCLUSION: The cell proliferation index, as measured by Ki-67, may be useful in the characterization of histological degree in glottic squamous cell tumors.

Histologic correlation of expression of Ki-67 in squamous cell carcinoma of the glottis according to the degree of cell differentiation / Correlação histológica da expressão do Ki-67 no Carcinoma Epidermoide Glótico de acordo com grau de diferenciação celular

INTRODUCTION: Squamous cell carcinoma is the most common neoplasm of the larynx and glottis, and its prognosis depends on the size of the lesion, level of local invasion, cervical lymphatic spread, and presence of distant metastases. Ki-67 (MKI67) is a protein present in the core, whose function is related to cell proliferation. AIM: To evaluate the expression of marker Ki-67 in squamous cell carcinoma of the larynx and glottis and its correlation to pathological findings. METHODS: Experimental study with immunohistochemistry analysis of Ki-67, calculating the percentage of the cell proliferation index in glottic squamous cell carcinomas. RESULTS: Sixteen cases were analyzed, with six well-differentiated and 10 poorly/moderately differentiated tumors. There was a correlation between cell proliferation index and degree of cell differentiation, with higher proliferation in poorly/moderately differentiated tumors. CONCLUSION: The cell proliferation index, as measured by Ki-67, may be useful in the characterization of histological degree in glottic squamous cell tumors. .

INTRODUÇÃO: O carcinoma de células escamosas é a neoplasia mais frequente da laringe e da região glótica, seu prognóstico depende do tamanho da lesão, do nível de invasão local, disseminação cervical linfática e da existência de metástases à distância. Ki-67 (MKI67) é uma proteína presente no núcleo, cuja função está relacionada com a proliferação celular. OBJETIVOS: Avaliar a expressão do marcador Ki-67 em carcinoma de células escamosas da laringe glóticos e correlacionar sua expressão com os achados anatomopatológicos. MÉTODO: Trabalho experimental de análise imunohistoquímica do Ki 67 através do cálculo percentual do índice de proliferação celular em produtos de carcinomas epidermóides glóticos. RESULTADOS: Dezesseis casos foram analisados, sendo seis bem diferenciados e dez pouco/moderadamente diferenciados. Houve correlação entre o índice de proliferação celular e o grau de diferenciação celular, sendo a proliferação maior nos pouco/moderadamente diferenciados. CONCLUSÃO: O índice de proliferação celular, medido pelo Ki-67 pode ser útil na caracterização do grau histológico em tumores glóticos de células escamosas. .

Low-level laser irradiation induces in vitro proliferation of mesenchymal stem cells / Laser de baixa intensidade induz à proliferação in vitro de células-tronco mesenquimais

Objective : To evaluate the effect of low-level laser irradiation on the proliferation and possible nuclear morphological changes of mouse mesenchymal stem cells. Methods : Mesenchymal stem cells derived from bone marrow and adipose tissue were submitted to two applications (T0 and T48 hours) of low-level laser irradiation (660nm; doses of 0.5 and 1.0J/cm2). The trypan blue assay was used to evaluate cell viability, and growth curves were used to analyze proliferation at zero, 24, 48, and 72 hours. Nuclear alterations were evaluated by staining with DAPI (4’-6-diamidino-2-phenylindole) at 72 hours. Results : Bone marrow-derived mesenchymal stem cells responded to laser therapy in a dose-dependent manner. Higher cell growth was observed when the cells were irradiated with a dose of 1.0J/cm2, especially after 24 hours (p<0.01). Adipose-derived mesenchymal stem cells responded better to a dose of 1.0J/cm2, but higher cell proliferation was observed after 48 hours (p<0.05) and 72 hours (p<0.01). Neither nuclear alterations nor a significant change in cell viability was detected in the studied groups. Conclusion : Low-level laser irradiation stimulated the proliferation of mouse mesenchymal stem cells without causing nuclear alterations. The biostimulation of mesenchymal stem cells using laser therapy might be an important tool for regenerative therapy and tissue engineering. .

Objetivo : Avaliar o efeito da terapia com laser de baixa intensidade sobre a proliferação e as possíveis alterações morfológicas nucleares em células-tronco mesenquimais de camundongos. Métodos : Células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea e do tecido adiposo foram submetidas a duas aplicações (T0 e T48 horas) de laser de baixa intensidade (660nm; doses de 0,5 e 1,0J/cm2). O ensaio de azul de tripan foi utilizado para a avaliação da viabilidade celular, e curvas de crescimento foram usadas para avaliar a proliferação das células em zero, 24, 48, e 72 horas. Alterações nucleares foram avaliadas por coloração com DAPI (4-6-diamidino-2-fenilindolo) em 72 horas. Resultados : As células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea responderam a terapia com laser de forma dose-dependente. Um maior crescimento celular foi observado quando as células foram irradiadas com dose de 1,0J/cm2, especialmente depois de 24 horas (p<0,01). As células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo responderam melhor à dose de 1,0J/cm2, com maior proliferação após 48 (p<0,05) e 72 horas (p<0,01). Nem alterações nucleares nem a mudança significativa na viabilidade celular foi detectada nos grupos estudados. Conclusão : Laser de baixa intensidade estimulou a proliferação de células-tronco mesenquimais sem causar alterações nucleares. A bioestimulação de células-tronco mesenquimais por laserterapia pode ser uma ferramenta importante para a terapia regenerativa e a engenharia tecidual. .

Effects of nandrolone decanoate on the viability of muscle satellite cells during the differentiation process / Influencia del anabolizante decanoato de nandrolona en la viabilidad de las células satélites musculares en el proceso de diferenciación / Influência do anabolizante decanoato de nandrolona sobre a viabilidade de células satélites musculares em processo de diferenciação

Studies indicate that the anabolic nandrolone decanoate (Deca-Durabolin(r)) can modulate cell cycle regulation, but little is known about its effects on muscle cells. Anabolic steroids are used, especially by athletes, to improve muscle mass and performance in the practice of exercises. The aim of this study was to evaluate the effect of the anabolic Deca-Durabolin(r) on the proliferation of skeletal muscle precursor cells C2C12. Cells were grown in Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), being supplemented with 10% Fetal Bovine Serum (FBS) and subjected to differentiation by the addition of 2% horse serum. They were incubated with anabolic at concentrations of 5, 10, 25 and 50 µM. The groups that received no anabolic or vehicle served as controls. The viability (proliferation) was evaluated by the MTT method (3-[4,5-Dimethylthiazol-2yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide; Thiazolyl blue) after one, three and five days of incubation. Three independent experiments were performed in each of the mentioned conditions, and the results were submitted to statistical analysis with significance level of p≤0.05 (ANOVA/Dunnett). Results showed no difference in viability between muscle cells treated with anabolic and the control cultures in all parameters. In conclusion, nandrolone, at the used concentrations, was not able to alter the viability of muscle C2C12 satellite cells...

Se utilizan los anabolizantes, en particular por atletas con el objetivo de aumentar la masa muscular y mejoría del desempeño. Este estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto del anabolizante Deca- Durabolin(r) sobre la viabilidad (proliferación) de las células satélites musculares C2C12 inducidas a la diferenciación, imitando el proceso de reparación tras una lesión. Las células fueron cultivadas en medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con 10% de suero fetal bovino (SFB) y sometidas a diferenciación mediante la adición de 2% de suero de caballo y, simultáneamente, incubadas con el anabolizante en las concentraciones de 5 , 10 , 25 y 50 µM. En los grupos que no recibieron el anabolizante, ni el vehículo sirvió como controle . La viabilidad (proliferación) se evaluó después de uno, tres y cinco días, utilizando el método de MTT (3 - [4,5 - dimetiltriazol - 2 - il ] -2,5 difeniltetrazolio) . Se realizaron tres experimentos independientes, en cada condición citada, y los resultados sometidos al análisis estadístico con nivel de significación de p≤0,05% (ANOVA/Dunnett). Los resultados permitieron verificar que no hubo diferencia en la viabilidad entre células musculares tratadas con anabolizante e inducidas a diferenciación y culturas de controles que sólo fueron inducidas a diferenciación en todos los parámetros evaluados. En conclusión, el anabolizante decanoato de nandrolona, en las concentraciones evaluadas, no fue capaz de alterar la viabilidad de células musculares C2C12 durante el proceso de diferenciación...

Os anabolizantes são utilizados, especialmente por atletas, com o intuito de aumento da massa muscular e melhora do desempenho. Este estudo objetivou avaliar o efeito do anabolizante Deca-Durabolin(r) sobre a viabilidade (proliferação) de células satélites musculares C2C12 induzidas à diferenciação, mimetizando o processo de reparo após lesão. As células foram cultivadas em Meio Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de Soro Fetal Bovino (SFB) e submetidas à diferenciação pela adição de 2% de soro de cavalo e concomitantemente incubadas com o anabolizante nas concentrações de 5, 10, 25 e 50 µM. Os grupos que não receberam o anabolizante nem o veículo serviram como controle. A viabilidade (proliferação) foi avaliada após um, três e cinco dias, utilizando o método de MTT (3-[4,5-dimetiltriazol-2-il]-2,5 difeniltetrazólio). Foram realizados três experimentos independentes, em cada condição citada, e os resultados submetidos à análise estatística com nível de significância de p≤0,05% (ANOVA/Dunnet). Os resultados permitiram verificar que não houve diferença na viabilidade entre células musculares tratadas com o anabolizante e induzidas à diferenciação e as culturas controles que somente foram induzidas à diferenciação, em todos os parâmetros avaliados. Em conclusão, o anabolizante decanoato de nandrolona, nas concentrações avaliadas, não foi capaz de alterar a viabilidade de células musculares C2C12 durante o processo de diferenciação...

Expressão imunoistoquímica de GLUT-1 e marcadores de proliferação e apoptose em anomalias vasculares orais / Immunohistochemical expression of GLUT-1 and markers of proliferation and apoptosis in oral vascular anomalies

As anomalias vasculares constituem um grupo de lesões distintas, mas que podem apresentar características clínicas e histopatológicas semelhantes, que podem levar a equívocos diagnósticos.Este estudo objetivou por meio da histopatologia e da expressão imuno-histoquímica daproteína humana transportadora de glicose (GLUT1), identificar e classificar corretamente as anomalias vasculares orais, além de analisar a imunoexpressão de marcadores de proliferação e apoptose (Ki-67 e Bcl2).Todos os casos diagnosticados como "hemangiomas orais" pertencentes aos arquivos do Serviço de Anatomia Patológica da disciplina de Patologia Oral do Departamento de Odontologia (DOD) da Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) foram revisados, totalizando 77 casos. A análise imuno-histoquímica para GLUT-1 revelou que apenas 26 (33,8%) dos espécimes tratavam-se de hemangiomas da infância (HIs) verdadeiros. Os 51 (66,2%%)espécimes GLUT-1 negativos foram então reclassificados em granulomas piogênicos (GPs) e malformações vasculares (MVs) a partir de suas características histopatológicas, totalizando 26 (33,8%) casos de HIs, 20 (26,0%) de GPs e 31 (40,2) casos de MVs orais. Os casos submetidos à análise do marcador Ki-67 apresentaram medianas diferentes HI (13,85), GP (33,70) e MV (4,55) com diferenças estatisticamente significantes entre elas (p<0,001). Em relação à proteína Bcl-2, os grupos também apresentaram diferentes medianas dos escores estabelecidos HI (1,00), GP (1,50), MVs (0,0), demonstrando diferenças estatisticamente significantes entre elas (p<0,001). Não foi observada correlação estatisticamente significante entre os índices de positividade para o Ki-67 e os escores de imunoexpressão de Bcl-2 em nenhum grupo.Dessa maneira, podemos concluir que se faz necessário uma revisão criteriosa e parametrizada dos casos de anomalias vasculares utilizando ferramentas auxiliares, como a GLUT-1, uma vez que os achados histopatológicos sozinhos, às vezes, não são suficientes para diferenciar algumas anomalias. Além disso, a análise das expressões de marcadores envolvidos nos níveis de proliferação das lesões é um aspecto importante para o melhor entendimento do seu comportamento biológico. (AU)

Vascular anomalies constitute a distinct group of lesions, but they may present similar clinical and histopatological characteristics, which can lead to diagnostic mistakes. This study aimed by histopathology and immunohistochemical expression of human glucose transporter protein (GLUT-1), correctly identify and classify oral vascular anomalies, besides analyzing the immunoexpression of markers proliferation and apoptosis (Ki-67 and Bcl-2). All cases diagnosed as "oral hemangiomas" belonging to the archives of the Service of Pathological Anatomy from the subject of Oral Pathology of the Department of Dentistry (DOD), of the Federal University of Rio Grande do Norte (UFRN) were reviewed, totalizing 77 cases. Immunohistochemical analysis for GLUT-1 showed that only 26 (33.8%) of the specimens were true infantile hemangiomas (IHs). The 51 (66.2%%) GLUT-1 negative specimens were then reclassified as pyogenic granulomas (PGs) and vascular malformations (VMs) from their histopathologic characteristics,totalizing 26 (33.8%) cases of IHs, 20 (26.0%) of PGs and 31 (40.2) cases of oral VMs. The cases analyzed by the marker Ki-67 showed different median IH (13,85), PG (33,70) and VM (4.55) with statistically significant differences between them (p <0.001). In relation to the protein Bcl-2, the groups also showed different median of the established scores IH (1.00), PG (1.50), VMs (0.0) demonstrating statistically significant differences between them (p<0,001). No statistically significant correlation between the indexes of positivity for Ki-67 and the scores of immunoexpression of Bcl-2 were observed in any group. Thus, we can conclude that it is necessary a careful and parameterized review of cases of vascular anomalies making use of auxiliary tools such as GLUT-1, since the histopathological findings alone, sometimes, are not sufficient to differentiate some anomalies. Furthermore, analysis of the expressions of markers involved in the levels of proliferation of lesions is important for a better understanding of its biological behavior aspect. (AU)